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粮食、油料检验粗蛋白质测定法

中华人民共和国国家标准

粮食、油料检验

粗蛋白质测定法

Inspection of grain and oilseeds

Methods for determination of crude protein

UDC (633.1+633.85).001.4

GB 5511-85


    本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。

1  仪器和用具

1.1  凯氏烧瓶:50ml;

1.2  圆底烧瓶:1000ml;

1.3  万用电炉

1.4  锥形烧瓶:100ml;

1.5  微量滴定管:5ml、刻度0.01ml;

1.6  容量瓶:50ml;

1.7  移液管:5ml;

1.8  量筒:10ml;

1.9  洗耳球;

1.10  凯氏微量蒸馏装置(见下图)、胶管等。

凯氏微量蒸馏装置图

1-蒸馏瓶;2-冷凝管;3-承接瓶;4-回流管-5-漏斗;

6-活塞; 7-簧夹;8-烧瓶

2  试剂

2.1  浓硫酸-过氧化氢-水混合液(2:1:3):在100ml水中缓慢加入浓硫酸200ml,冷却后再加入30%过氧化氢300ml,混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月。

2.2  混合催化剂:硫酸铜(CuSO4·5H2O)10g,硫酸钾(A.R)100g,硒粉0.2g,在研体中研细使通过40目筛,混匀后备用;

2.3  40%氢氧化钠溶液;

2.4  2%硼酸溶液;

2.5  0.01N盐酸溶液;

2.6  甲基红乙醇溶液:0.1g甲基红溶于75ml 95%乙醇中(先在研钵中加乙醇研磨);

2.7  次甲基蓝乙醇溶液:0.1g次甲基蓝溶于80mL95%乙醇中。临用时将以上两液按2:1比例混合即成。在酸域呈紫红色,在pH5.5时溶液无色,在碱域呈绿色。

3  操作方法

3.1  消化

    按照含有10~30mg粗蛋白质计算试样用量,一般可称取试样0.2~0.3g(W,精确到0.0001g),用蜡光纸卷着倒入50ml凯氏烧瓶中,加混合指示剂1g,同时加入硫酸-过氧化氢-水混合液3~5ml,稍加振摇,斜置于电炉上,在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热,勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二,待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时,再继续加热沸腾10min,取出待消化液冷却至室温后,加水10~20ml,再待溶液温度降到室温后,干净地转入50ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀备用。

3.2  蒸馏

按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。

在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片,加5滴混合指示剂,加几滴酸液使水呈紫红色,连接4,1,2,并检查有无漏气处。

量取30ml 1%硼酸溶液注入锥形瓶3内,加混合指示剂2滴,使冷凝管下端插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5ml,由漏斗5注入瓶1内,再加入10ml,冲洗漏斗5。量取40%氢氧化钠溶液1ml,提起活塞注入瓶1内,立即用水2~5ml冲洗漏斗5,旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。

打开簧夹7,关闭活塞6,加热烧瓶8,待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时,经2min降低瓶3,使冷凝管下端露出液面,再蒸馏1min后,用水冲洗管下端。

蒸馏结束后,掐紧簧夹7,断绝蒸汽,使瓶1内溶液全部吸入管4中,放松簧夹7,从漏斗5加入蒸馏水40~50ml,再通蒸汽加热和回流,将瓶1洗涤一次备用。

3.3  滴定

用0.01N盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液,滴至溶液出现浅紫红色为止。

为消除试剂误差,除不加试样外,按照上述操作方法,做一次空白试验。

4  结果计算

粗蛋白质的干基含量按下列公式计算:

粗蛋白质(干基%)

式中:V――蒸馏时取用稀释的消化液体积,ml;

     V1――实验用去的盐酸溶液体积,ml;

         V0――空白试验用去的盐酸溶液体积,ml;

         N――盐酸溶液的当量浓度,N;

         14――每毫克当量盐酸相当于氮的克数;

         P――蛋白质换算系数(小麦5.7,其他谷物及豆类6.25);

         W――试样重量,mg;

         M――试样水分百分率,%。

双试验结果允许差:粗蛋白质含量在15.0%以下时,不超过0.2%;粗蛋白质含量在15.1%以上时,不超过0.4%。求其平均数,即为测定结果,测定结果取小数点后第一位。

注:①消化过程中,若硫酸损失过多时,可酌量补加硫酸,勿使瓶内干涸。

    ②消化液加入稀释后,应及时进行蒸馏,否则应保存消化液,临用时加水稀释。

③加入蒸馏瓶1内的碱液,必须过量。

④也可使用由0.2%甲基红乙醇溶液1份和0.2%溴甲酚绿乙醇溶液5份配制的混合指示剂(临用时混合),终点为灰红色。

 

 

 

 

附录A

大豆水溶性蛋白质测定法

(补充件)

 

A.1  仪器和用具

1.1  粉碎机;

1.2  磨口带塞锥形瓶:500ml;

1.3  振荡器:国际型;

1.4  容量瓶:250ml;

1.5  离心机,附50ml离心管;

1.6  玻璃漏斗;

1.7  锥形瓶、移液管;

1.8  其他仪器和用具与本标准第1章同。

A.2  试剂

所用试剂与本标准第2章同。

A.3  操作方法

A.3.1  试样制备:将大豆粉碎使90%以上通过60目筛。

A.3.2  提取:称取粉碎试样5g(W,精确至0.01g)于磨口带塞锥形瓶中,加水200ml,摇混使均匀分散,然后在25~30℃温度下振荡2h,取出后将混合液转移至250ml容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀后静置1~2min,将上层清液倒入离心管中,在每分钟转数1500转的离心机中离心10min,再将离心液用快速滤纸或玻璃纤维过滤,收集清晰滤液于锥形烧瓶中,即为样品水溶性蛋白质测定液。

A.3.3  定氮:吸取测定液10ml于50ml或100ml凯氏定氮瓶中,按本标准3.1、3.2、3.3步骤进行消化、蒸馏、滴定。记下滴定样品液及空白液消耗盐酸的数量。

A.4  结果计算

水溶性蛋白质含量按下列公式计算:

水溶性蛋白质(干基%)=

式中:V1――滴定5ml样品液消耗盐酸体积,ml;

      V0――滴定5ml空白液消耗盐酸体积,ml;

      N――盐酸溶液的当量浓度,N;

     0.014――每毫克当量氮的克数;

     6.25――大豆含氮量换算成蛋白质系数;

     10――吸收提取液进行消化的体积,ml;

    250――总提取液的体积,ml;

      5――吸收消化液进行蒸馏的体积,ml

     50――总消化液的体积,ml;

    W――试样重量,g;

    M――试样水分百分率,%。

双试验结果允许差不超过0.4%,求其平均数,即为测定结果。测定结果取小数点后第一位。

注:①大豆氮可溶解指数(%)的计算方法是:以所测得的大豆水溶性蛋白质(%)除以大豆总蛋白质(%),再乘以100即得。

②本方法采用样品制备方法及提取方法使测定结果较为稳定,但如因粉碎样品细度达不到要求,即可采用称取试样5.00g于研钵中,加5ml水,用手研磨10min,将混合物用200ml水转移至250ml磨口瓶中,再在振荡器上振荡30min,然后同本标准的3.2进行定容、离心、过滤、定氮。

 

 

 

 


附加说明:

本标准由中华人民共和国商业部提出。

本标准由商业部粮食储运局负责起草。

本标准主要起草人高修吾、杨浩然、吴艳霞、吕桂芬。

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